Plásmido CRISPR de Activación (h) Clusterin: sc-417830-ACT

El CLU humano codifica la clusterina, una glucoproteína secretada e intracelular que funciona como chaperona extracelular regulando la proteostasis, el transporte de lípidos y la inhibición del complemento. La clusterina influye en programas de supervivencia celular al modular las respuestas al estrés oxidativo, la apoptosis y la eliminación de proteínas mal plegadas o agregadas, conectándose con la señalización inflamatoria y la remodelación de la matriz extracelular. Está implicada en la neurodegeneración y en la biología cardiovascular por sus efectos sobre el manejo del amiloide, la integridad sináptica y la inflamación vascular, y se estudia con frecuencia en biología tumoral por sus funciones en la adaptación al estrés y los mecanismos de resistencia a terapias. Estas funciones hacen de CLU un nodo útil para desentrañar vías que vinculan el estrés proteotóxico, la regulación inmunitaria y las respuestas tisulares al daño.

Clusterin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLU sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Clusterin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLU en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLU, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Clusterin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLU y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Clusterin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Clusterin en células tumorales con expresión de CLU silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.