Plásmido CRISPR de Activación (h) CLCA1: sc-402998-ACT

La CLCA1 humana (proteína accesoria del canal de cloruro 1) es una glicoproteína secretada asociada a mucinas, expresada predominantemente en los epitelios de las vías respiratorias y del intestino, donde modula el transporte iónico epitelial, la hidratación del moco y la función de barrera. CLCA1 influye de forma indirecta en la conductancia de cloruro activada por calcio y se ha vinculado con la diferenciación de células caliciformes y con programas de señalización inflamatoria en tejidos mucosos. Su expresión se correlaciona con procesos de remodelado epitelial y se ha asociado con la hipersecreción de moco en la vía aérea y la inflamación alérgica, así como con estados epiteliales desregulados en contextos de enfermedades gastrointestinales. Dado que CLCA1 está estrechamente acoplada a la biología de las mucinas y a la diferenciación epitelial, sirve como un marcador útil y un nodo mecanístico para estudiar transiciones del linaje secretor e interacciones inmunitarias en mucosas.

CLCA1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLCA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CLCA1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLCA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLCA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CLCA1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLCA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CLCA1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CLCA1 en células tumorales con expresión de CLCA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.