Plásmido CRISPR de Activación (h) Clathrin Heavy Chain/CLTC: sc-400863-ACT

CLTC codifica la cadena pesada de clatrina, un componente estructural central de las fosas y vesículas recubiertas de clatrina que coordina la curvatura de la membrana y la selección de carga durante la endocitosis mediada por clatrina. A través de interacciones con complejos de proteínas adaptadoras y factores accesorios, CLTC regula la internalización de receptores, el reciclaje de vesículas sinápticas, el tráfico endosomal y el transporte en la red trans-Golgi, modulando la señalización downstream y la captación de nutrientes. Esta vía influye en la homeostasis de los receptores tirosina cinasa, los GPCR y los receptores inmunitarios, vinculando la actividad de CLTC con redes de señalización proliferativas y de respuesta al estrés. Alteraciones genéticas y un tráfico dependiente de clatrina desregulado se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con reordenamientos relacionados con malignidad que involucran a CLTC, lo que respalda estudios mecanísticos de defectos en el transporte vesicular en modelos de enfermedad.

Clathrin Heavy Chain/CLTC El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLTC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Clathrin Heavy Chain/CLTC El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLTC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLTC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Clathrin Heavy Chain/CLTC. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLTC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Clathrin Heavy Chain/CLTC en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Clathrin Heavy Chain/CLTC en células tumorales con expresión de CLTC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.