Cks1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403019-ACT

CKS1B codifica a Cks1, uma subunidade regulatória conservada de quinases dependentes de ciclinas (CDKs) que coordena a progressão do ciclo celular ao modular a atividade das CDKs e a seleção de substratos. A Cks1 está intimamente ligada ao controle ubiquitina–proteassoma mediado por SCF(SKP2) de inibidores do ciclo celular como CDKN1B/p27, influenciando assim a transição G1/S, a competência replicativa e a fidelidade dos checkpoints. Por meio dessas interações, CKS1B contribui para redes de sinalização proliferativa que se cruzam com respostas a danos no DNA e com o controle mitótico. A expressão desregulada de CKS1B tem sido associada a fenótipos de proliferação aberrante e instabilidade genômica, frequentemente investigados em contextos de pesquisa em oncologia e em neoplasias hematológicas.

Cks1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CKS1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cks1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CKS1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CKS1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cks1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CKS1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cks1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cks1 em células tumorais com expressão de CKS1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.