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染色质免疫沉淀(ChIP)裂解缓冲液是 ChIP 分析的基本组成部分,是分子生物学研究中广泛使用的一种技术,用于研究染色质中蛋白质-DNA 的相互作用。这种专用缓冲液可有效裂解细胞并溶解染色质,同时保留蛋白质-DNA 复合物。ChIP 溶解缓冲液的成分通常包括 Tris-HCl、氯化钠 (NaCl)、Triton X-100 或 NP-40 和乙二胺四乙酸 (EDTA) 以及蛋白酶抑制剂。Tris-HCl 可作为缓冲剂维持稳定的 pH 值,而 NaCl 则可通过破坏细胞膜内的离子相互作用促进细胞裂解。Triton X-100 或 NP-40 等非离子去垢剂可溶解细胞膜,将染色质释放到缓冲液中。通常加入乙二胺四乙酸(EDTA)来螯合二价阳离子,从而抑制 DNA 降解酶(如 DNases 和 RNases)。加入蛋白酶抑制剂是为了防止蛋白质在裂解过程中降解,从而保留蛋白质-DNA 复合物供下游分析使用。在 ChIP 实验中,首先用 ChIP 裂解缓冲液处理细胞或组织,使细胞裂解并将染色质释放到缓冲液中。然后对裂解液进行超声处理或酶解,将染色质破碎成小块。然后向裂解液中加入特异于相关蛋白质的抗体,以免疫沉淀蛋白质-DNA 复合物。免疫沉淀后,清洗蛋白质-DNA 复合物以除去非特异性结合的 DNA,随后纯化 DNA,以便通过 qPCR、微阵列或新一代测序等技术进行分析。ChIP 溶解缓冲液对于在整个 ChIP 检测过程中保持蛋白质-DNA 复合物的完整性至关重要,可确保准确可靠地检测 DNA 上的蛋白质结合位点。缓冲液成分和裂解条件的优化对于实现高效细胞裂解、染色质溶解和蛋白质-DNA 相互作用的保存至关重要,最终可促成 ChIP 实验的成功和有意义的生物学发现。
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产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
ChIP Lysis Buffer, 300 ml and 6 tablets | sc-45000 | 300 ml and 6 tablets | $182.00 |