CHDH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432328

Descripción general

Chdh codifica la colina deshidrogenasa (CHDH), una enzima de la membrana interna mitocondrial que cataliza la oxidación de la colina a betaína aldehído, favoreciendo la producción posterior de betaína y el metabolismo de un carbono. A través de su relación con la disponibilidad de donadores de metilo y el equilibrio de osmólitos, CHDH influye en la homeostasis de fosfolípidos, la bioenergética mitocondrial y las respuestas celulares al estrés metabólico y oxidativo. En ratones, la alteración de la oxidación de la colina puede afectar el manejo hepático de lípidos y el balance energético sistémico, vinculando las vías asociadas a CHDH con fenotipos metabólicos relevantes para el hígado graso y rasgos de riesgo cardiometabólico relacionados. Estas funciones hacen de CHDH un nodo útil para estudiar el metabolismo mitocondrial, la regulación dependiente de la metilación y las interacciones nutriente–gen en la fisiología de mamíferos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CHDH (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chdh en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chdh junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chdh tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CHDH.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chdh para la investigación de la señalización de CHDH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Chdh críticos para la función de CHDH
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chdh para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CHDH CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CHDH CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chdh. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CHDH (m) y el plásmido HDR CHDH (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chdh para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chdh definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.