CEP192 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-406971-LAC-2

O CEP192 humano codifica uma proteína de andaime do centrosomo essencial para a maturação do centrosomo e para a atividade do centro organizador de microtúbulos (MTOC), coordenando o recrutamento de material pericentriolar e promovendo a montagem correta do fuso bipolar durante a mitose. O CEP192 atua em vias centrais de duplicação do centrosomo e de controle do ciclo celular, interagindo com reguladores como PLK1 e AURKA para sustentar a nucleação de microtúbulos e a progressão mitótica. A desregulação ou mutação de CEP192 tem sido associada à instabilidade cromossômica e a um número aberrante de centrosomos, características ligadas a distúrbios do desenvolvimento e a fenótipos proliferativos relacionados ao câncer. A edição gênica de CEP192 permite estudos mecanísticos da biologia do centrosomo, da integridade do checkpoint do fuso e da estabilidade genômica usando modelos celulares, incluindo imagem de células vivas e mapeamento proteômico de complexos centrosomais.

As Partículas de Ativação Lentivirais CEP192 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CEP192 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CEP192 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CEP192, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CEP192. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CEP192 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.