Particules Lentivirales d'Activation (h) CEACAM1: sc-417666-LAC

CEACAM1 (carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1) est un récepteur de la superfamille des immunoglobulines exprimé par les cellules épithéliales, les cellules endothéliales et plusieurs sous-populations de leucocytes, où il assure l’adhésion cellule–cellule et une signalisation dépendante du contact. Grâce à des motifs ITIM cytoplasmiques et à des interactions avec des kinases de la famille Src et des phosphatases telles que SHP-1/SHP-2, CEACAM1 module des voies qui contrôlent la signalisation des récepteurs immunitaires, la fonction de barrière, l’apoptose et le métabolisme cellulaire. CEACAM1 contribue à la régulation des réponses immunitaires innées et adaptatives, notamment via une signalisation inhibitrice dans les lymphocytes T et les cellules NK, et influence des programmes angiogéniques et inflammatoires dans les microenvironnements tissulaires. Une expression ou une signalisation dérégulée de CEACAM1 a été associée à une surveillance immunitaire altérée, à des mécanismes de maladies inflammatoires et à des phénotypes liés au cancer, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études d’immunologie tumorale et de biologie épithéliale.

Les particules d'activation lentivirales CEACAM1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CEACAM1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CEACAM1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CEACAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CEACAM1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CEACAM1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.