Cdk8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435217
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Cdk8 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Cdk8, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdk8 Anticuerpo (D-9): sc-13155
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Cdk8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-435217 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La quinasa dependiente de ciclina 8 (Cdk8) es una quinasa de serina/treonina asociada al complejo Mediator que regula la transcripción dependiente de la ARN polimerasa II mediante la fosforilación de factores de transcripción y de componentes de la maquinaria transcripcional. En células de ratón, Cdk8 integra señales de vías como Wnt/β-catenina, TGF-β/SMAD y MAPK para modular la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y la expresión génica sensible al estrés. A través de su control de la actividad de potenciadores (enhancers) y promotores, Cdk8 influye en las salidas transcripcionales metabólicas e inflamatorias y puede configurar redes transcripcionales específicas de linaje. La actividad desregulada de CDK8 se ha vinculado a una regulación transcripcional aberrante en contextos oncogénicos y del desarrollo, lo que convierte a Cdk8 en una diana relevante para estudios mecanísticos del control de la transcripción y del “cross-talk” entre vías de señalización.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cdk8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cdk8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cdk8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cdk8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cdk8.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cdk8 para la investigación de la señalización de Cdk8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cdk8 críticos para la función de Cdk8
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cdk8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Cdk8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Cdk8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cdk8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cdk8 (m) y el plásmido HDR Cdk8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cdk8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cdk8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.