Plásmido CRISPR de Activación (h) CDCP1: sc-404730-ACT

CDCP1 (proteína 1 con dominio CUB) es una glicoproteína transmembrana implicada en la remodelación de la adhesión celular y la transducción de señales en la superficie celular. Funciona como andamiaje para quinasas como miembros de la familia SRC y PKCδ, conectando señales extracelulares con vías que regulan la dinámica del citoesqueleto, la señalización de supervivencia y la migración. La actividad de CDCP1 se asocia con el procesamiento proteolítico y con una señalización dependiente de fosforilación que influye en el crecimiento dependiente de anclaje y en las respuestas al estrés. Se ha descrito una desregulación de la expresión o la señalización de CDCP1 en múltiples contextos de cáncer, y se estudia por sus funciones en la invasión, fenotipos asociados a la metástasis y mecanismos de resistencia a terapias a nivel celular.

CDCP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDCP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CDCP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDCP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDCP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CDCP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDCP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CDCP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CDCP1 en células tumorales con expresión de CDCP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.