CD44 Plasmide Double Nickase (h): sc-400209-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD44 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD44 Double Nickase Plasmid (h) e il CD44 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD44. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD44 Antibody (DF1485): sc-7297
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD44 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400209-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD44 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400209-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD44 codifica una glicoproteina di superficie cellulare che funge da principale recettore per l’acido ialuronico e per ligandi correlati della matrice extracellulare, coordinando l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice. Attraverso interazioni con le proteine ERM e la segnalazione mediata da recettori tirosin-chinasici, CD44 contribuisce al rimodellamento del citoscheletro, alla migrazione e a vie di sopravvivenza che includono la segnalazione delle Rho GTPasi e le cascate PI3K–AKT e MAPK/ERK. Lo splicing alternativo e la glicosilazione dinamica generano isoforme di CD44 che influenzano la plasticità epitelio–mesenchimale, il traffico delle cellule infiammatorie e il rimodellamento tissutale. L’espressione disregolata di CD44 e l’utilizzo delle sue isoforme sono spesso oggetto di studio nell’invasione e metastatizzazione tumorale, nei fenotipi simil-staminali e nelle malattie infiammatorie croniche.
CD44 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD44 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD44. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD44. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD44 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.