CD40 Lentiviral Activation Particles (m): sc-423444-LAC

Das murine Cd40 kodiert CD40, ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das vor allem auf antigenpräsentierenden Zellen stark exprimiert wird und dort über CD40–CD40L-Interaktionen die Immunaktivierung koordiniert. Die CD40-Signalgebung bindet TRAF-Adapterproteine und aktiviert NF-κB-, MAPK- und PI3K-abhängige Programme, die die Reifung dendritischer Zellen, die Proliferation von B-Zellen, Keimzentrumsreaktionen, den Klassenwechsel (Class-Switch-Rekombination) sowie die Zytokinproduktion regulieren. Über diese Signalwege prägt CD40 die T‑Zell-Priming-Phase und die humorale Immunität und trägt zu Entzündungsschaltkreisen bei, die für Autoimmunität, chronische Entzündung und tumorassoziierte Immunmodulation relevant sind. Veränderungen der Cd40-Expression werden daher in Modellen der Immundysregulation, der lymphatischen Biologie und der Wirt‑Pathogen-Interaktionen umfassend untersucht.

CD40 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Cd40-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CD40 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Cd40-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CD40-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Cd40-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.