CD38 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419548-ACT

Das Mausgen *Cd38* kodiert CD38, ein multifunktionales Ektoenzym, das den NAD⁺-Stoffwechsel katalysiert und dabei Second Messenger wie zyklisches ADP-Ribose und NAADP erzeugt, wodurch die intrazelluläre Mobilisierung von Ca²⁺ reguliert wird. Die CD38-Aktivität prägt Aktivierung, Differenzierung und Adhäsion von Immunzellen und trägt über die Modulation NAD⁺-abhängiger Signalwege zur metabolischen und Redox-Homöostase bei. In hämatopoetischen und stromalen Kompartimenten greifen CD38-gekoppelte Signalwege mit purinergen Signalen, calciumabhängigen Transkriptionsprogrammen und Netzwerken inflammatorischer Zytokine ineinander. Eine veränderte CD38-Expression oder -Enzymfunktion wird in Maus-Krankheitsmodellen häufig als molekularer Indikator für Immunfehlregulation, metabolisches Remodeling und altersassoziierte Veränderungen des NAD⁺-Umsatzes herangezogen.

CD38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cd38-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cd38-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cd38-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD38-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cd38-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD38-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD38-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cd38-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.