CD30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423446

Panoramica

Il gene murino Tnfrsf8 codifica CD30, un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso sui linfociti attivati, che trasduce segnali tramite proteine adattatrici come le TRAF per modulare l’attività delle vie NF-κB e MAPK. La segnalazione dipendente da CD30 influenza i programmi di attivazione delle cellule T e B, la produzione di citochine e le decisioni di sopravvivenza che modellano l’omeostasi immunitaria. Nei modelli murini, l’alterazione della funzione di CD30 è stata impiegata per indagare i meccanismi di differenziazione dei linfociti, la regolazione immunitaria e l’infiammazione all’interno dei tessuti linfoidi. Le vie associate a CD30, quando deregolate, sono rilevanti per lo studio dell’attivazione immunitaria aberrante e di fenotipi linfoproliferativi, a supporto della sua utilità come nodo genetico per la ricerca in immunologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD30 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnfrsf8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnfrsf8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnfrsf8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD30.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnfrsf8 per lo studio della segnalazione di CD30, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnfrsf8 critici per la funzione di CD30
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnfrsf8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnfrsf8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD30 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD30 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnfrsf8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnfrsf8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.