CD3-ζ/η Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419556

Descripción general

Cd247 codifica la subunidad de señalización CD3ζ/η del complejo del receptor de células T (TCR), un adaptador que contiene motivos de activación basados en tirosina de inmunorreceptores (ITAM) y que acopla el reconocimiento del antígeno a cascadas de fosforilación intracelular. Tras la activación del TCR, los ITAM de CD3ζ/η reclutan y activan quinasas como LCK y ZAP70, promoviendo el ensamblaje del signalosoma LAT/SLP-76 y la activación posterior de las vías MAPK, NF-κB y NFAT, que controlan la activación de las células T, la producción de citocinas y la supervivencia. La expresión o señalización alteradas de CD247 contribuyen a una menor capacidad de respuesta de las células T y a la desregulación inmunitaria, y se han asociado con fenotipos inflamatorios y autoinmunes, así como con la evasión inmune tumoral en el microambiente. En ratones, la alteración de Cd247 se utiliza ampliamente para analizar la selección tímica, la tolerancia periférica y los estados de células T efectoras frente a agotadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD3-ζ/η (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd247 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd247 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd247 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD3-ζ/η.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd247 para la investigación de la señalización de CD3-ζ/η, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cd247 críticos para la función de CD3-ζ/η
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd247 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD3-ζ/η CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd247. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD3-ζ/η (m) y el plásmido HDR CD3-ζ/η (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd247 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd247 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.