CD154 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401682-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CD154O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase CD154 (h) e o Plasmídeo Double Nickase CD154 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CD40LG. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CD154 Anticorpo (F-1): sc-374635
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CD154 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD154 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD40LG codifica o CD154 (ligante de CD40), uma proteína de membrana do tipo II expressa transitoriamente em células T CD4+ ativadas, que se liga ao CD40 em células B, células dendríticas e macrófagos para coordenar o crosstalk entre a imunidade adaptativa e a inata. A sinalização CD154–CD40 promove a ativação de células B, a formação de centros germinativos, a recombinação de troca de classe das imunoglobulinas e o “licenciamento” de células dendríticas por meio de programas transcricionais conduzidos por NF-κB e MAPK. Esse eixo também molda a produção de citocinas e a sinalização coestimuladora nas respostas de células T auxiliares foliculares, bem como em vias de apresentação de antígenos. A atividade ou expressão desregulada de CD40LG está associada a fenótipos de imunodeficiência e de hiperativação imune, o que a torna relevante para estudos mecanísticos da imunidade humoral, da inflamação e da regulação do microambiente linfoide.
CD154 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CD40LG em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CD40LG. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CD40LG. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CD40LG interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.