CBP/KAT3A/CREBBP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400200-ACT

CREBBP kodiert das CREB-bindende Protein (CBP/KAT3A), einen transkriptionellen Koaktivator und Lysin-Acetyltransferase, der Histone und Nicht-Histon-Substrate acetyliert, um die Zugänglichkeit des Chromatins und die Genexpression zu modulieren. CBP integriert Signale von CREB, nukleären Rezeptoren und entwicklungsrelevanten Transkriptionsfaktoren und koordiniert Programme, die an der Zellzykluskontrolle, an DNA-Schadensantworten, der Differenzierung und neuronaler Plastizität beteiligt sind. Über seine Funktionen an Enhancern und bei der Transkriptionselongation wirkt CBP an Signalwegen wie der cAMP/CREB-Signalkaskade sowie an der umfassenderen epigenetischen Regulation linien-/zelltypspezifischer Transkription mit. Eine veränderte CREBBP-Aktivität oder -Dosierung ist mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen verknüpft und wird wiederholt mit krebsassoziierter Fehlregulation von Transkription und Chromatin in Verbindung gebracht.

CBP/KAT3A/CREBBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CREBBP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CBP/KAT3A/CREBBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CREBBP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CREBBP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CBP/KAT3A/CREBBP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CREBBP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CBP/KAT3A/CREBBP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CBP/KAT3A/CREBBP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CREBBP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.