caspase-5 p10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401520-ACT

O CASP5 humano codifica a caspase-5, uma caspase inflamatória cuja pequena subunidade p10 é gerada durante a maturação proteolítica do zimogénio e contribui para a formação do complexo protease ativo. O CASP5 participa na sinalização imunitária inata a jusante da deteção citosólica de sinais de perigo, promovendo atividade de caspases inflamatórias que pode desencadear morte celular piroptótica e o processamento de citocinas, frequentemente em coordenação com vias do inflamassoma. A sua expressão e o seu estado de ativação são estudados em contextos de infeção, inflamação estéril e ativação de células mieloides, nos quais a sinalização desregulada de caspases inflamatórias pode influenciar fenótipos de lesão tecidular. Assim, o CASP5 é relevante para mecanismos que ligam a sinalização por reconhecimento de padrões, programas de morte celular e redes de expressão génica inflamatória.

caspase-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CASP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

caspase-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CASP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CASP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de caspase-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CASP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de caspase-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via caspase-5 em células tumorais com expressão de CASP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.