casein kinase IIα′ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401148-ACT

CSNK2A2 は、構成的に活性を持つセリン／スレオニンキナーゼであるカゼインキナーゼII（CK2）の触媒サブユニット α′ をコードしており、調節性の β サブユニットと会合して CK2 ホロ酵素を形成します。CK2 は、クロマチン構造の制御、転写および RNA プロセシング、細胞周期の進行、DNA 損傷応答に関与する幅広い基質をリン酸化し、Wnt/β-カテニン、NF-κB、PI3K/AKT、MAPK などの経路にまたがるシグナルを統合します。こうしたネットワークレベルの機能を通じて、CSNK2A2 は増殖、ストレス適応、アポトーシスの制御に寄与し、がん原性シグナルの機構研究、神経発生過程、炎症経路の調節に関する研究において重要な対象となります。CK2 活性の破綻や CSNK2A2 発現の変化は、複数の疾患文脈において、腫瘍生物学、異常なリン酸化プログラム、ならびに細胞恒常性の攪乱と関連づけられてきました。

casein kinase IIα′ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CSNK2A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

casein kinase IIα′ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CSNK2A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCSNK2A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性casein kinase IIα′の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCSNK2A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcasein kinase IIα′依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCSNK2A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcasein kinase IIα′経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。