Plasmide CRISPR/Cas9 KO Calregulin (h): sc-400775

Présentation

CALR code la calréticuline, une chaperonne multifonctionnelle du réticulum endoplasmique (RE) et une protéine de liaison au Ca²⁺ à grande capacité, qui soutient le contrôle qualité du repliement des protéines et l’homéostasie du calcium intracellulaire. La calréticuline participe au cycle calnexine/calréticuline, en coordonnant la maturation des glycoprotéines et leur rétention dans le RE, et contribue à la signalisation du stress du RE ainsi qu’à la réponse aux protéines mal repliées (unfolded protein response, UPR). Au-delà du RE, CALR influence la présentation d’antigènes via l’assemblage du CMH de classe I, module l’adhésion et la migration cellulaires par des processus liés aux intégrines, et s’interface avec des voies de signalisation dépendantes du Ca²⁺. Une activité dérégulée de CALR a été associée à des altérations de la protéostase et de la signalisation immunitaire dans divers contextes pathologiques, notamment en hématologie et dans la biologie des tumeurs solides, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la fonction du RE et de la régulation des états cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Calregulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CALR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CALR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CALR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Calregulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CALR pour l'étude de la signalisation de Calregulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CALR essentiels à la fonction de Calregulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CALR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Calregulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Calregulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CALR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Calregulin plasmide HDR (h) et le Calregulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CALR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CALR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.