Calponin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402882-ACT

O gene humano CNN2 codifica a calponina 2, uma proteína reguladora que se liga à actina e modula a organização do citoesqueleto, a contratilidade actomiosínica e a forma celular. A calponina 2 associa-se a fibras de stress e a estruturas contráteis semelhantes às do músculo liso, influenciando processos como adesão celular, migração e mecanotransdução por meio da dinâmica actina–miosina e de vias de sinalização ligadas a GTPases da família Rho. Ao ajustar a tensão do citoesqueleto e programas de motilidade, o CNN2 tem sido estudado em contextos que incluem o comportamento de células vasculares e inflamatórias, a remodelação associada à fibrose e a invasão e metástase de células tumorais. Assim, alterações na expressão ou na localização da calponina 2 podem servir como um indicador mecanístico de mudanças em vias do citoesqueleto que afetam a remodelação tecidular e fenótipos celulares relacionados com doença.

Calponin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CNN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calponin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CNN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CNN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calponin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CNN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calponin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calponin 2 em células tumorais com expressão de CNN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.