Plasmide Double Nickase (h) Calpain 2: sc-401113-NIC

Le gène humain **CAPN2** code la calpaïne 2, une protéase à cystéine dépendante du calcium qui réalise une protéolyse limitée afin de remodeler les protéines du cytosquelette et de la signalisation. La calpaïne 2 participe au renouvellement des adhérences focales, au trafic membranaire et aux réponses au stress déclenchées par le calcium, influençant la migration cellulaire, la dynamique d’adhésion et la progression du cycle cellulaire. Par le clivage régulé de substrats dans des voies telles que la signalisation intégrine/FAK et des réseaux sensibles aux facteurs de croissance, **CAPN2** contribue à façonner la plasticité cellulaire et la protéostase. Une activité des calpaïnes dérégulée a été associée à une organisation anormale du cytosquelette et à des modifications de la signalisation observées dans des contextes de recherche liés aux maladies neurodégénératives, cardiovasculaires et au cancer.

Calpain 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAPN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAPN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAPN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAPN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.