Calgizzarin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404169-ACT

S100A11はカルギザリン（calgizzarin）をコードしており、カルギザリンはカルシウム結合性のS100ファミリータンパク質です。リン脂質や細胞骨格要素と会合して膜ダイナミクス、細胞運動性、ストレス適応シグナル伝達を調節します。カルギザリンはアクチン再構築、小胞輸送、細胞周期進行の協調など、Ca2+依存性プロセスに関与し、上皮可塑性や炎症性微小環境の文脈でしばしば研究されています。S100A11発現の変化は、複数のがんおよび線維化モデルにおいて、増殖制御の破綻、浸潤関連表現型、アポトーシス抵抗性と関連づけられています。ハブ様のカルシウムセンサーとして、カルギザリンは、カルシウムシグナルが細胞骨格の組織化や転写プログラムとどのように統合されるかを解明するための機序的な足がかりを提供します。

Calgizzarin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性S100A11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Calgizzarin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における S100A11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はS100A11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Calgizzarinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のS100A11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCalgizzarin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびS100A11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCalgizzarin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。