Plásmido CRISPR de Activación (h) Cacna2d1: sc-402833-ACT

CACNA2D1 codifica la subunidad auxiliar α2δ1 de los canales de calcio dependientes de voltaje, un regulador clave del tráfico de los canales, su localización en la membrana y las propiedades de compuerta que determinan la entrada de Ca2+ durante la actividad eléctrica. Al ajustar la señalización dependiente de calcio, Cacna2d1 influye en el acoplamiento excitación–contracción, la liberación de neurotransmisores y las vías posteriores vinculadas a la regulación transcripcional y a las respuestas celulares al estrés. La alteración de la expresión de CACNA2D1 se ha asociado con una homeostasis del calcio desregulada en contextos cardíacos y neuromusculares, y se ha estudiado en relación con fenotipos arritmogénicos, circuitos de señalización del dolor y la excitabilidad neuronal. Como componente de un complejo de canales en la superficie celular, proporciona un punto de entrada accesible para analizar la señalización del calcio dependiente de estímulos y el comportamiento electrofisiológico a nivel de red en sistemas modelo humanos.

Cacna2d1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CACNA2D1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cacna2d1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CACNA2D1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CACNA2D1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cacna2d1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CACNA2D1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cacna2d1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cacna2d1 en células tumorales con expresión de CACNA2D1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.