Partículas Lentivirales de Activación (h) c-Kit: sc-400106-LAC

El KIT humano codifica la tirosina quinasa receptora c-Kit (CD117), un receptor de superficie celular activado por el factor de células madre (stem cell factor) que regula la supervivencia, la proliferación, la diferenciación y la migración celulares. La señalización de c-Kit dependiente de ligando se propaga a través de las vías PI3K–AKT, RAS–MAPK, JAK–STAT y las quinasas de la familia SRC, moldeando la hematopoyesis, la biología de los melanocitos, el desarrollo de las células germinales y la función de los mastocitos. La actividad aberrante de KIT está implicada en programas de crecimiento oncogénico y en una señalización microambiental alterada, mientras que la expresión desregulada de c-Kit puede perturbar el compromiso de linaje y los estados de activación de las células inmunitarias. En consecuencia, KIT se estudia ampliamente como un regulador dependiente del contexto del comportamiento de células madre/progenitoras, del tráfico del receptor y de la dinámica de transducción de señales.

Las partículas de activación lentiviral c-Kit (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KIT en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral c-Kit (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KIT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de c-Kit. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KIT y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.