Plasmide CRISPR d'Activation (h) c-Jun: sc-400077-ACT

Le gène humain **JUN** code **c-Jun**, un composant central du complexe de facteurs de transcription **AP-1**, qui intègre les signaux extracellulaires dans des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation, l’apoptose et les réponses au stress cellulaire. L’activité de c-Jun est régulée par phosphorylation en aval de la signalisation **MAPK/JNK**, reliant les stimuli inflammatoires, le stress oxydatif et les voies des facteurs de croissance à la chromatine et à une reprogrammation transcriptionnelle. En coopération avec d’autres membres de la famille AP-1 et des réseaux transcriptionnels plus larges, **JUN** influence des processus tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, la régulation immunitaire et l’adaptation métabolique. Une signalisation JUN/AP-1 dérégulée est fréquemment associée à la transformation oncogénique, à des phénotypes invasifs et à une résistance au stress cellulaire dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique d’intérêt pour la recherche axée sur les voies de signalisation.

c-Jun Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JUN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-Jun Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JUN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JUN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-Jun. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JUN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-Jun au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-Jun dans les cellules tumorales présentant une expression de JUN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.