BRWD1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430062-LAC

Il gene murino Brwd1 codifica BRWD1, una proteina associata alla cromatina contenente un bromodominio e ripetizioni WD, che agisce da regolatore epigenetico della trascrizione tramite il riconoscimento degli istoni acetilati e il coordinamento dei complessi di rimodellamento della cromatina. BRWD1 è stata implicata in programmi di espressione genica specifici di linea, in particolare in contesti ematopoietici e delle cellule germinali, dove supporta le decisioni di destino cellulare e il controllo trascrizionale associato alla differenziazione. Attraverso i suoi ruoli nell’organizzazione della cromatina e nella regolazione trascrizionale, BRWD1 è rilevante per studi sul controllo della proliferazione, sulla regolazione del genoma e sui meccanismi che possono contribuire a stati di espressione genica deregolati associati a fenotipi oncogenici e dello sviluppo. Queste proprietà rendono Brwd1 un bersaglio utile per indagare vie dipendenti dalla cromatina, reti trascrizionali e transizioni di stato cellulare in sistemi modello murini.

Le particelle di attivazione lentivirale BRWD1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Brwd1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRWD1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Brwd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BRWD1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Brwd1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.