Brk Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401127-ACT

A proteína tirosina quinase 6 (PTK6), também conhecida como Brk, é uma tirosina quinase não receptora envolvida na regulação da sinalização epitelial, da dinâmica do citoesqueleto e da migração celular. A Brk modula vias acionadas por fatores de crescimento e citocinas, cruzando-se com a sinalização da família EGFR/HER e com componentes a jusante das redes MAPK e PI3K/AKT, influenciando programas de proliferação e sobrevivência. A atividade e a localização da PTK6 têm sido associadas a alterações na fosforilação de proteínas adaptadoras e reguladores transcricionais, moldando as respostas celulares ao estresse e a sinais de diferenciação. A expressão desregulada de PTK6 foi relatada em múltiplos contextos tumorais, tornando-a um nó molecular útil para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica, fenótipos de invasão e reconfiguração de vias.

Brk O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTK6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Brk O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTK6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTK6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Brk. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTK6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Brk no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Brk em células tumorais com expressão de PTK6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.