Plásmido Doble Nickase (h) BRAF: sc-400121-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BRAF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BRAF (h) y el plásmido de doble nickasa BRAF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BRAF. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BRAF Anticuerpo (F-7): sc-5284
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BRAF | sc-400121-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BRAF | sc-400121-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAF codifica una cinasa proteica de serina/treonina que actúa como un efector clave aguas abajo de RAS para propagar la señalización a través de la cascada RAF–MEK–ERK/MAPK. Al regular, de manera dependiente de la fosforilación, el control de programas transcripcionales, la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la supervivencia, BRAF integra señales extracelulares en respuestas celulares coordinadas. La actividad desregulada de BRAF se asocia con señalización MAPK aberrante y un control del crecimiento alterado en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para diseccionar redes de señalización oncogénica. Por ello, el BRAF humano se analiza con frecuencia en el mapeo de vías, estudios de genotipo–fenotipo y análisis de retroalimentación de señalización y de la comunicación cruzada con PI3K/AKT y vías de respuesta al estrés.
BRAF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BRAF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BRAF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BRAF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BRAF alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.