Plasmide Double Nickase (h) BPI: sc-404909-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BPI correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BPI Double Nickase (h) et le plasmide BPI Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BPI. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BPI Antibody (H-10): sc-514212
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BPI | sc-404909-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BPI | sc-404909-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La BPI humaine (protéine bactéricide/augmentant la perméabilité, *bactericidal/permeability-increasing protein*) est une protéine des granules des neutrophiles qui se lie au lipopolysaccharide (LPS) des bactéries à Gram négatif, neutralisant l’activité endotoxinique et favorisant l’élimination bactérienne. Elle participe à la défense immunitaire innée au niveau des muqueuses et à l’échelle systémique en modulant les signaux inflammatoires en aval de la reconnaissance du LPS, notamment des voies qui convergent vers la production de cytokines et l’activation des cellules myéloïdes. Les variations d’expression ou de fonction de la BPI ont été étudiées dans le contexte des maladies inflammatoires des voies aériennes, des infections associées à la mucoviscidose, de l’endotoxémie liée au sepsis, ainsi que d’autres situations où des interactions hôte–pathogène dérégulées contribuent à la pathologie. La perturbation expérimentale de la BPI permet des études mécanistiques de la fonction de barrière antimicrobienne, de la biologie des neutrophiles et des réponses inflammatoires induites par le LPS.
BPI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BPI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BPI. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BPI. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BPI.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.