Plasmide Double Nickase (h) BMP-4: sc-400543-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BMP-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BMP-4 Double Nickase (h) et le plasmide BMP-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BMP4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BMP-4 Antibody (3H2.3): sc-12721
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BMP-4 | sc-400543-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BMP-4 | sc-400543-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BMP4 code la protéine morphogénétique osseuse 4 (BMP‑4), un ligand sécrété de la superfamille du TGF‑β qui transmet des signaux via les récepteurs BMP de type I/II afin d’activer SMAD1/5/8 et d’interagir avec les voies MAPK. BMP‑4 régule la mise en place des patrons embryonnaires, la spécification du mésoderme, la différenciation ostéogénique et chondrogénique, ainsi que l’homéostasie tissulaire, via des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération et l’engagement du destin cellulaire. Une dérégulation de la signalisation BMP4/BMP‑4 a été impliquée dans des anomalies du développement, des dynamiques épithélio‑mésenchymateuses aberrantes, des remaniements liés à la fibrose et la biologie tumorale, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier une signalisation morphogénique dépendante du contexte. Dans des cellules humaines en culture, l’activité de BMP‑4 est couramment évaluée par la phosphorylation des SMAD, l’induction de gènes cibles de BMP (p. ex. la famille ID) et les interactions avec les réseaux WNT/FGF/NOTCH.
BMP-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BMP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BMP4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BMP4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BMP4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.