Plasmide Double Nickase (m) BLM: sc-419336-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) BLM correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BLM Double Nickase (m) et le plasmide BLM Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Blm. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BLM Antibody (B-4): sc-365753
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) BLM | sc-419336-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) BLM | sc-419336-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Blm* code l’hélicase de l’ADN BLM de la famille RecQ, un facteur clé du maintien du génome qui résout des structures secondaires anormales de l’ADN et favorise une recombinaison homologue fidèle. BLM intervient dans la reprise des fourches de réplication, la résection des extrémités et la dissolution des doubles jonctions de Holliday, de concert avec le complexe BTR (BLM–TOP3A–RMI1/2), limitant ainsi les événements de crossing-over et les réarrangements chromosomiques. Par ces activités, BLM s’articule avec les voies de réponse aux dommages de l’ADN impliquant la signalisation ATR/CHK1 et le réseau de l’anémie de Fanconi lors du stress réplicatif. L’altération de la fonction de BLM est associée à une augmentation des échanges entre chromatides sœurs, à l’instabilité génomique et à des phénotypes de prédisposition au cancer, faisant de *Blm* un locus utile pour étudier les défauts de réparation de l’ADN et les processus mutagènes dans les cellules de mammifères.
BLM Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Blm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Blm. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Blm. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Blm.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.