BimEL Double Nickase Plasmid (h): sc-400515-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BimEL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BimEL Double-Nickase-Plasmid (h) und BimEL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BCL2L11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BimEL Double Nickase Plasmid (h) | sc-400515-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BimEL Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400515-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L11 kodiert das nur BH3-domänenhaltige proapoptotische Protein Bim, und die Isoform Bim_EL ist eine weit verbreitete Spleißvariante, die zelluläre Stresssignale integriert, um die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran einzuleiten. Bim_EL fördert die intrinsische Apoptose, indem es antiapoptotische Mitglieder der BCL-2-Familie neutralisiert und die Aktivierung von BAX/BAK erleichtert; dadurch verknüpft es Entzug von Wachstumsfaktoren, ER-Stress und zytoskelettale Signale mit der Caspase-Aktivierung. Seine Aktivität wird durch transkriptionelle Kontrolle (z. B. FOXO), posttranslationale Phosphorylierung (z. B. MAPK/ERK-abhängiger Abbau) und die Sequestrierung an das Mikrotubuli-Netzwerk reguliert, wodurch Bim_EL an der Schnittstelle von Überlebens- und Todeswegen positioniert ist. Eine Fehlregulation der durch BCL2L11 vermittelten apoptotischen „Priming“-Bereitschaft wurde mit onkogenem Überleben, Defekten der Immunhomöostase und veränderten Antworten auf zellulären Stress in Verbindung gebracht, was BCL2L11 zu einem zentralen Knotenpunkt in der Apoptose- und Zellschicksalsforschung macht.
BimEL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BCL2L11-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BCL2L11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BCL2L11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BCL2L11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.