Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bcl10: sc-400483-ACT

BCL10 code pour Bcl10, une protéine adaptatrice qui relie la signalisation des récepteurs de l’antigène à des programmes transcriptionnels en aval dans les cellules immunitaires. Bcl10 agit au sein du complexe CARMA1–Bcl10–MALT1 (CBM) pour favoriser l’activation canonique de NF-κB, soutenant l’activation des lymphocytes, leur prolifération et les réponses cytokiniques ; elle peut également influencer la signalisation MAPK et l’apoptose. Une activité ou une localisation de BCL10 dérégulées ont été associées à une modification de la sortie de la voie NF-κB et de l’homéostasie immunitaire, et sont fréquemment étudiées dans le contexte de la biologie des malignités lymphoïdes et des réseaux de signalisation inflammatoire. Par conséquent, BCL10 constitue un nœud fréquemment exploré dans les études mécanistiques de la signalisation proximale aux récepteurs, de la régulation transcriptionnelle et des interactions entre voies de signalisation.

Bcl10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcl10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcl10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcl10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcl10 dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.