Plasmide Double Nickase (m) Bcl-xS/L: sc-419309-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Bcl-xS/L correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Bcl-xS/L Double Nickase (m) et le plasmide Bcl-xS/L Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Bcl2l1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Bcl-xL Antibody (H-5): sc-8392
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Bcl-xS/L | sc-419309-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Bcl-xS/L | sc-419309-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Bcl2l1 code les isoformes protéiques Bcl-xS et Bcl-xL, des régulateurs clés de la famille BCL-2 qui déterminent le seuil apoptotique en contrôlant la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale et la libération du cytochrome c. Bcl-xL est majoritairement anti-apoptotique et limite l’activation des caspases dépendante de BAX/BAK, tandis que Bcl-xS peut antagoniser les membres pro-survie de la famille et orienter les cellules vers l’apoptose. Par ces fonctions, Bcl2l1 intègre les signaux de survie en aval des voies activées par les facteurs de croissance et influence les réponses au stress, l’homéostasie mitochondriale et les décisions de destinée cellulaire. Une expression dérégulée de Bcl2l1 ou un déséquilibre entre isoformes est associé à une sensibilité modifiée à l’apoptose et fait l’objet de nombreuses études en biologie du cancer, dans la neurodégénérescence, la régulation immunitaire et des modèles de lésion tissulaire.
Bcl-xS/L Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Bcl2l1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Bcl2l1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Bcl2l1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Bcl2l1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.