BCKDE1A Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-417950-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- BCKDE1AO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase BCKDE1A (h) e o Plasmídeo Double Nickase BCKDE1A (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para BCKDHA. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:BCKDE1A Anticorpo (H-5): sc-271538
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
BCKDE1A Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-417950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BCKDE1A Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-417950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCKDHA codifica a subunidade E1α do complexo desidrogenase de α-cetoácidos de cadeia ramificada (BCKDH), um sistema enzimático mitocondrial que catalisa a descarboxilação oxidativa de α-cetoácidos derivados de aminoácidos de cadeia ramificada. Essa atividade é central para o catabolismo de valina, leucina e isoleucina e conecta a renovação de aminoácidos à produção de acetil-CoA e succinil-CoA, influenciando o balanço redox mitocondrial e o metabolismo energético. A função de BCKDHA é regulada pela dinâmica de fosforilação do complexo BCKDH e pela disponibilidade de cofatores mitocondriais, integrando o sensoriamento de nutrientes ao fluxo metabólico. A disrupção de BCKDHA está associada a prejuízo no metabolismo de aminoácidos de cadeia ramificada e a erros inatos do metabolismo, como a doença da urina do xarope de bordo, tornando-o relevante para estudos de estresse metabólico, disfunção mitocondrial e sinalização impulsionada por aminoácidos.
BCKDE1A O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus BCKDHA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de BCKDHA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função BCKDHA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com BCKDHA interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.