Particules Lentivirales d'Activation (h) ATGL: sc-401711-LAC

Le gène humain PNPLA2 code la lipase des triglycérides du tissu adipeux (ATGL), enzyme limitante de la vitesse de la première étape de l’hydrolyse des triacylglycérols au niveau des gouttelettes lipidiques, produisant des diacylglycérols et des acides gras libres destinés à la β‑oxydation et à la signalisation lipidique. L’activité d’ATGL s’intègre à la biogenèse des gouttelettes lipidiques, à la lipophagie et à des programmes transcriptionnels dépendants des PPAR qui coordonnent l’homéostasie énergétique dans les tissus métaboliques. La perturbation de PNPLA2/ATGL modifie le stockage lipidique intracellulaire, la disponibilité des substrats pour les mitochondries et l’équilibre des médiateurs lipidiques inflammatoires. Une fonction d’ATGL dérégulée a été associée à une accumulation lipidique ectopique et à des phénotypes cardiométaboliques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de lipotoxicité et de remodelage métabolique.

Les particules d'activation lentivirales ATGL (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PNPLA2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATGL (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PNPLA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATGL. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PNPLA2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.