Plasmide Double Nickase (h) ATG7: sc-400997-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATG7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATG7 Double Nickase (h) et le plasmide ATG7 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATG7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATG7 Antibody (B-9): sc-376212
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATG7 | sc-400997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATG7 | sc-400997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG7 code une enzyme d’activation de type E1, essentielle à la biogenèse des autophagosomes, en catalysant des réactions de conjugaison de type ubiquitine dans le système ATG12–ATG5 et en favorisant, via ATG3, la lipidation de LC3/ATG8. Par ces activités, ATG7 coordonne la macroautophagie et contribue à la protéostasie cellulaire, à l’adaptation au stress nutritionnel, au contrôle qualité mitochondrial et à la modulation des voies de signalisation innées et inflammatoires. Des altérations de la fonction ou de l’expression d’ATG7 ont été associées à une dérégulation du flux autophagique et à une sensibilité accrue au stress cellulaire, avec des implications en neurodégénérescence, en biologie du cancer, dans les dysfonctionnements métaboliques et dans les interactions hôte–pathogène liées aux infections. ATG7 est donc largement utilisé comme levier génétique pour étudier des phénotypes dépendants de l’autophagie et les interconnexions entre voies de signalisation.
ATG7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATG7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATG7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATG7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATG7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.