Atg4b Double Nickaseプラスミド (h): sc-404173-NIC

ATG4BはAtg4bをコードしており、Atg4bはシステインプロテアーゼとして、LC3やGABARAPを含むATG8ファミリータンパク質を処理します。具体的には、脂質化（リピデーション）に備えたプライミングを行うとともに、オートファゴソーム成熟過程での脱脂質化（デリピデーション）によって再利用を可能にします。これらの段階を通じてAtg4bは、オートファジーフラックス、マイトファジー、損傷タンパク質や細胞小器官の分解回転を制御し、細胞ストレスへの適応や代謝恒常性と結びついています。ATG4Bによるオートファジー経路の調節はmTORおよびAMPKシグナル伝達とも交差し、抗原提示や自然免疫応答にも影響を及ぼします。ATG4B活性の破綻やオートファジー動態の変化は、がん、神経変性、炎症性表現型と関連づけられており、ATG4Bはプロテオスタシスの機構研究における有用な解析ノードとなっています。

Atg4b ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATG4B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATG4B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATG4Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATG4Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。