ASS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401923-ACT

ヒトASS1（アルギニノコハク酸シンターゼ1）遺伝子は、細胞質に局在する酵素をコードしており、ATP依存的にシトルリンとアスパラギン酸を縮合させてアルギニノコハク酸を生成する反応を触媒します。これは尿素回路およびアルギニン生合成における中核的な段階です。ASS1は窒素の排出とアルギニンの利用可能性を調節することで、細胞内のアミノ酸恒常性、一酸化窒素（NO）代謝、ならびに下流のポリアミン合成に影響を与えます。ASS1発現の変化は、遺伝性の尿素回路機能障害と関連するほか、腫瘍細胞における代謝依存性を再編し得ます。腫瘍ではしばしば、アルギニン要求性（アルギニン栄養要求性）や、一炭素代謝およびヌクレオチド代謝の再配線が観察されます。これらの特性により、ASS1はヒト細胞モデルにおいて、代謝経路制御、栄養ストレス応答、ならびに遺伝子型―表現型関係を研究するための有用な結節点となります。

ASS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。