Plásmido CRISPR de Activación (h) ARID1B: sc-402365-ACT

ARID1B codifica la proteína 1B que contiene el dominio de interacción con regiones ricas en AT, una subunidad esencial del complejo SWI/SNF (BAF) de remodelación de la cromatina dependiente de ATP, que regula el posicionamiento de los nucleosomas y los programas de transcripción durante el desarrollo y la diferenciación. Al coordinar la accesibilidad de los potenciadores (enhancers) y la remodelación de los promotores, ARID1B influye en la especificación de linajes, el control del ciclo celular y la expresión génica en respuesta al daño del ADN en múltiples contextos de señalización. La alteración de la función de ARID1B se ha implicado en trastornos del neurodesarrollo y en diversos cánceres, en los que la regulación alterada de la cromatina contribuye a estados transcripcionales aberrantes y a una identidad celular deteriorada. Estas propiedades convierten a ARID1B en un nodo ampliamente estudiado en la regulación epigenética, el control transcripcional y el mapeo de genotipo a fenotipo.

ARID1B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARID1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARID1B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARID1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARID1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARID1B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARID1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARID1B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARID1B en células tumorales con expresión de ARID1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.