Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ARH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406114
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ARH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ARH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARH Anticuerpo (F-11): sc-514106
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ARH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406114 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
LDLRAP1 codifica la proteína adaptadora ARH, un componente clave de la endocitosis mediada por clatrina que acopla el receptor de LDL al complejo AP-2 y a la cubierta de clatrina para su internalización en la membrana plasmática. ARH reconoce motivos NPXY en LDLR y coordina la selección de carga, la formación de vesículas y el tráfico del receptor a través de compartimentos endosómicos. Esta vía es central para la captación celular de colesterol y la homeostasis de lipoproteínas, vinculando la función de LDLRAP1 con la regulación de redes del metabolismo lipídico. Las variantes con pérdida de función en LDLRAP1 se asocian con la hipercolesterolemia autosómica recesiva, lo que convierte a ARH en un nodo útil para analizar defectos de internalización de LDLR y las consecuencias posteriores en la señalización.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LDLRAP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LDLRAP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LDLRAP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LDLRAP1 para la investigación de la señalización de ARH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de LDLRAP1 críticos para la función de ARH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LDLRAP1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ARH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ARH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LDLRAP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARH (h) y el plásmido HDR ARH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LDLRAP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LDLRAP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.