APOBEC3B Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401700-LAC

APOBEC3B (subunidade catalítica 3B da enzima de edição de mRNA da apolipoproteína B) é uma desaminase de citidina que converte citosina em uracilo em DNA de fita simples, contribuindo para a restrição antiviral inata e para o controlo de retroelementos endógenos. A sua atividade interage com processos de replicação e reparação do DNA ao gerar lesões que podem ser processadas em mutações, influenciando assim a estabilidade genómica. A expressão desregulada de APOBEC3B tem sido associada a assinaturas mutacionais características observadas em vários tipos de cancro e é estudada no contexto da evolução tumoral, das respostas a danos no DNA e do stresse de replicação. Como membro nuclear da família APOBEC, a APOBEC3B é amplamente utilizada para investigar mecanismos de mutagénese, interações hospedeiro–vírus e determinantes de fenótipos impulsionados por mutações em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais APOBEC3B (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de APOBEC3B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais APOBEC3B (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição APOBEC3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de APOBEC3B. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo APOBEC3B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.