Plásmido CRISPR de Activación (m) ANKRD9: sc-428809-ACT

El gen Ankrd9 de ratón codifica ANKRD9, una proteína que contiene repeticiones de anquirina e implica en redes de interacciones proteína–proteína que dan forma a la señalización intracelular y a la regulación del estado celular. Aunque la función molecular de ANKRD9 aún no se ha caracterizado por completo, las proteínas con repeticiones de anquirina suelen modular actividades de adaptadores/andamiaje, influyendo en vías vinculadas con la organización del citoesqueleto, el tráfico vesicular y las respuestas transcripcionales a señales metabólicas y de estrés. La expresión de Ankrd9 se ha estudiado en contextos relevantes para la homeostasis tisular y la diferenciación, donde los cambios en las redes reguladoras pueden contribuir a fenotipos asociados con inflamación, desequilibrio metabólico y programas de crecimiento desregulados. En consecuencia, Ankrd9 sirve como un nodo útil para investigar la conectividad de vías y la remodelación de redes génicas en sistemas modelo celulares y *in vivo* de ratón.

ANKRD9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ankrd9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ANKRD9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ankrd9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ankrd9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ANKRD9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ankrd9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ANKRD9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ANKRD9 en células tumorales con expresión de Ankrd9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.