Partículas Lentivirales de Activación (h) Anillin: sc-403342-LAC

ANLN codifica anilina, un andamiaje conservado que se une a actina y miosina, organiza el anillo contráctil y estabiliza el surco de segmentación durante la citocinesis. La anilina coordina la remodelación de actomiosina dependiente de RhoA y enlaza la F-actina con las septinas y factores asociados a la membrana para asegurar la correcta formación del cuerpo medio y la abscisión, acoplando la progresión del ciclo celular con la dinámica del citoesqueleto. La expresión o función desregulada de ANLN se asocia con división celular aberrante, inestabilidad genómica y estados proliferativos alterados observados en múltiples contextos de cáncer y enfermedades hiperproliferativas. Como nodo que conecta la organización del citoesqueleto y el control mitótico, ANLN se utiliza ampliamente para investigar mecanismos de redondeamiento celular, posicionamiento del surco independiente del huso y fenotipos relacionados con la aneuploidía.

Las partículas de activación lentiviral Anillin (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ANLN en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Anillin (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ANLN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Anillin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ANLN y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.