Plasmide CRISPR d'Activation (h) Amelogenin: sc-403337-ACT

AMELY code l’amélogénine, une protéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui contribue à l’organisation de la matrice de l’émail lors de l’odontogenèse et soutient la minéralisation de l’émail en régulant la croissance des cristaux d’hydroxyapatite ainsi que le remodelage de la matrice. L’amélogénine participe à des interactions épithélio-mésenchymateuses étroitement coordonnées et à des événements de maturation dépendants de protéases qui façonnent la formation de l’émail, reliant l’expression d’AMELY à des programmes développementaux des tissus minéralisés. Les variations des voies associées à l’amélogénine sont pertinentes pour l’intégrité structurale de l’émail et sont fréquemment exploitées en génétique humaine, car les différences de séquence entre AMELX et AMELY fournissent des marqueurs informatifs du sexe utilisés en médecine légale et en anthropologie. En recherche biomédicale, AMELY constitue un modèle accessible pour l’étude du contrôle transcriptionnel des gènes de la matrice, de l’état de différenciation et des réseaux géniques associés à la biomineralisation.

Amelogenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AMELY sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Amelogenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AMELY dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AMELY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Amelogenin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AMELY natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Amelogenin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Amelogenin dans les cellules tumorales présentant une expression de AMELY silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.