Plásmido Doble Nickase (h) alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3: sc-416366-NIC

ATP1A3 codifica la subunidad catalítica α3 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, una ATPasa de tipo P que utiliza la hidrólisis de ATP para intercambiar Na⁺ intracelular por K⁺ extracelular, manteniendo el potencial de membrana y los gradientes iónicos. Esta bomba sustenta la excitabilidad neuronal, la recuperación del potencial de acción y procesos de transporte activo secundario que acoplan los gradientes de iones a la recaptación de neurotransmisores y a la regulación del volumen celular. La actividad de ATP1A3 se integra con vías que gobiernan la homeostasis electroquímica, la señalización sináptica y las respuestas al estrés ante la demanda metabólica en tejidos excitables. Las alteraciones genéticas y funcionales de ATP1A3 se asocian con fenotipos de enfermedades neurológicas, lo que la convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la disfunción del transporte iónico y sus consecuencias a nivel de circuitos.

alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP1A3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP1A3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP1A3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP1A3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.