ALK-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400728-ACT

ACVRL1 codifica a activin receptor-like kinase 1 (ALK-1), um recetor quinase de serina/treonina do tipo I, enriquecido no endotélio, pertencente à superfamília do TGF-β, que transduz sinais de BMP9/BMP10. Após a ligação do ligando, a ALK-1 coopera com recetores do tipo II para fosforilar SMAD1/5/8 e coordenar programas transcricionais que regulam a angiogénese, a remodelação vascular e a quiescência endotelial. Este eixo de sinalização interseta-se com o equilíbrio TGF-β/SMAD2/3 e com sinais dependentes de Notch para regular a maturação dos vasos e a identidade arteriovenosa. A atividade desregulada de ACVRL1 está associada a malformações vasculares hereditárias, incluindo fenótipos relacionados com a telangiectasia hemorrágica hereditária, tornando-o um alvo central para estudos mecanísticos em biologia vascular.

ALK-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACVRL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ALK-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACVRL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACVRL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ALK-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACVRL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ALK-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ALK-1 em células tumorais com expressão de ACVRL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.