Alix CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422154

概要

Pdcd6ipはALIXをコードしており、ALIXは多機能なアダプタータンパク質として、CHMP4タンパク質を含むESCRT構成因子やTSG101などのパートナーとの相互作用を介して、膜リモデリングとエンドソーム輸送を結び付けている。マウス細胞では、ALIXは多胞体（MVB）の形成、エクソソーム放出、細胞質分裂の最終切断（アブシジョン）、および細胞膜修復に寄与し、さらにその結合ネットワークを通じてアポトーシス関連シグナル伝達にも影響し得る。ALIX依存的なESCRT活性は、エンベロープウイルスの出芽過程でも利用され、膜受容体のターンオーバーも制御することから、Pdcd6ipは細胞シグナル伝達やプロテオスタシスを制御する経路と関連付けられる。ESCRT/ALIX介在性輸送の破綻は、実験系において神経変性、腫瘍生物学、免疫およびウイルス病態と関連することが示されており、Pdcd6ipは膜動態の機構研究に有用なハブ（結節点）となっている。

Alix CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPdcd6ip遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pdcd6ip内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pdcd6ipのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Alixタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Alixシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pdcd6ip欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Alixの機能に不可欠なPdcd6ipエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pdcd6ipゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Alix CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAlix CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pdcd6ip遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Alix HDRプラスミド（m）および Alix HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPdcd6ipホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPdcd6ip標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。