Aldolase B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432929

Visão geral

Aldob codifica a aldolase B, uma enzima glicolítica e frutolítica que cliva frutose-1,6-bisfosfato e frutose-1-fosfato para gerar fosfatos de triose, conectando a degradação de carboidratos à produção de energia a jusante e ao fluxo biossintético. Em camundongos, a atividade da aldolase B é mais proeminente em hepatócitos e em células do túbulo proximal renal, sustentando a homeostase glicêmica hepática, o metabolismo da frutose e a adaptação metabólica durante ciclos de jejum e alimentação. A disfunção de ALDOB está classicamente associada ao comprometimento do processamento da frutose e a distúrbios mais amplos no equilíbrio entre glicólise e gliconeogênese, tornando-o relevante para o estudo de respostas ao estresse metabólico e da fisiologia de hepatócitos. Aldob também fornece um ponto acessível para investigar a comunicação entre vias (crosstalk) entre glicólise, gliconeogênese e sinalização impulsionada por frutose em modelos de doenças centrados no fígado.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Aldolase B (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Aldob em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Aldob, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Aldob na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Aldolase B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Aldob para a investigação da sinalização de Aldolase B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Aldob críticos para a função Aldolase B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Aldob para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Aldolase B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Aldolase B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Aldob. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Aldolase B Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Aldolase B (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Aldob para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Aldob definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.